在生命科學(xué)領(lǐng)域，熒光素標(biāo)記的DNA 探針（以下簡(jiǎn)稱“熒光探針”）廣泛應(yīng)用于檢測(cè)和鑒別特定的DNA。熒光探針會(huì)與特定的DNA 進(jìn)行選擇性結(jié)合，因此可以利用熒光標(biāo)記檢測(cè)到特定的DNA。因?yàn)闊晒馑赜卸喾N類型，掌握熒光探針的熒光波長(zhǎng)在檢測(cè)DNA 時(shí)十分重要。 本文向您介紹使用熒光分光光度計(jì)RF-6000 的三維光譜測(cè)定功能，對(duì)兩種熒光探針進(jìn)行熒光測(cè)定的示例

儀器、測(cè)定方法和結(jié)果 :

圖1 為RF-6000 的外觀圖。RF-6000 具有三維光譜測(cè)定功能和自動(dòng)光譜校正功能，可以在短時(shí)間內(nèi)對(duì)較寬的波長(zhǎng)范圍進(jìn)行測(cè)定。自動(dòng)光譜校正功能是指不受儀器影響（不使用儀器函數(shù)）自動(dòng)獲得校正光譜的功能，在測(cè)定時(shí)可以自動(dòng)獲得正確的熒光光譜以及激發(fā)光譜。

本次分析對(duì)使用不同熒光素標(biāo)記的熒光探針A、熒光探針B分別進(jìn)行了三維光譜測(cè)定。測(cè)試三維光譜時(shí)，依次改變激發(fā)波長(zhǎng)，并測(cè)定熒光光譜，這樣就得到了三維光譜。得到的數(shù)據(jù)中橫軸對(duì)應(yīng)熒光光譜（Em），縱軸對(duì)應(yīng)激發(fā)光譜（Ex）。 圖2 為熒光探針A 的測(cè)定結(jié)果；圖3 為熒光探針B 的測(cè)定結(jié)果。這些是由校正光譜組成的三維光譜。每個(gè)樣品的測(cè)定時(shí)間約為3 分鐘。如箭頭所示，熒光探針A 主要在①和②處出現(xiàn)熒光峰，熒光探針B 主要在①處出現(xiàn)熒光峰。 熒光探針A（圖2）的峰①于550 nm 處激發(fā)，熒光波長(zhǎng)約為600 nm；峰②于510 nm 處激發(fā)，熒光波長(zhǎng)約為530 nm。熒光探針B（圖3）的峰①是于550 nm 處激發(fā)，熒光波長(zhǎng)約為600 nm。

光譜測(cè)定

以三維光譜圖的任意坐標(biāo)自由截取熒光光譜以及激發(fā)光譜。此時(shí)，橫軸方向上截取的光譜將作為熒光光譜；縱軸方向上截取

的光譜將作為激發(fā)光譜。 在熒光探針A 三維光譜（圖2）中，獲得了峰①和峰②的熒光光譜，分別顯示在圖4 和圖5 中。由圖可知，峰①的熒光波長(zhǎng)為598 nm；峰②的熒光波長(zhǎng)為532 nm。 在熒光探針B 三維光譜（圖3）中，獲得了峰①的熒光光譜和激發(fā)光譜。圖6 和圖7 分別顯示熒光光譜和激發(fā)光譜。由此可知，熒光波長(zhǎng)為604 nm，最佳激發(fā)波長(zhǎng)為550 nm。 另外，通過三維光譜得到不受儀器影響的校正光譜，由此可檢測(cè)正確的熒光波長(zhǎng)位置

總結(jié):使用熒光分光光度計(jì)測(cè)定了熒光探針的三維光譜，并且能夠自動(dòng)獲得校正光譜。使用傳統(tǒng)機(jī)型獲取校正光譜，需要進(jìn)行手動(dòng)數(shù)據(jù)處理，而RF-6000 則無(wú)需該操作。綜上所述，使用RF-6000可以高精度高效率的進(jìn)行熒光測(cè)定